HPLC préparative appliquée à la purification de peptides Présentiel

AXE 9 - Chimie analytique

Environnement scientifique et technique de la formation

Institut des Biomolécules Max Mousseron
https://ibmm.umontpellier.fr

Synbio3
https://ibmm.umontpellier.fr/synbio3/

Chromatographie et électrophorèse

HPLC préparative appliquée à la purification de peptides

PROGRAMME

JOUR 1

LIEU
MONTPELLIER (34)

ORGANISATION
14 h
6 stagiaires maximum

9h00 - 12h30 - Formation théorique (3h30) COURS

• Principes généraux : comprendre les phénomènes mis en jeux en chromatographie
• Silices greffées : fabrication, état du marché, apprendre à choisir le bon support
• Grandeurs fondamentales : définitions, apprendre à les calculer
• Facteurs influençant les purifications : temp ; nature des éluants (compo et pH), géométrie colonne, volume d'injection, charge, type de greffage

Alternance de cours (7 h) et de TP/TD (7 h).
Test d'évaluation en fin de formation.
Un support papier et un fichier au format PDF seront mis à disposition du stagiaire.

13h30 -17h00 - Méthodologie (3h30) COURS

• Préparation de l'échantillon
• Détermination des paramètres chromatographiques
• Exemple d'étude méthodologique : pH-temps d'élution-estimation de la quantité à purifier-écriture de méthode
• Les bonnes pratiques et erreurs à éviter
• Exercices d'application à effectuer en autonomie

COÛT PÉDAGOGIQUE
1326 Euros

À L'ISSUE DE LA FORMATION
Evaluation de la formation par les stagiaires. Envoi d'une attestation de formation.

DATE DU STAGE
Réf. 25 150 : du mardi 07/10/25 à 09:00 au mercredi 08/10/25 à 17:00

9h00 - 12h30 - Travaux pratiques / Travaux dirigés (3h30)

• Détermination expérimentale du volume mort et du volume délai (3 injections)
• (1 injection sans colonne de 200µl de DMSO à 100% de voie A - 1 injection avec colonne de 200µl de DMSO à 100% de voie A - 1 élution de 10 minutes voie A (ACN) et voie B (ACN+5% Acétone))
• Déterminer par le calcul tous les paramètres chromatographiques (Débit optimal - volume retard - temps retard - quantité de silice - volume d'injection - temps réel d'élution - % réel d'élution)
• Détermination graphique du % d'élution observé estimé du composé ciblé
• Déterminer le gradient de purification
• Ecriture de la méthode sur l'appareil
• Estimer le temps de rétention en mode préparatif.

13h30-17h00 - Travaux pratiques / Travaux dirigés (3h30)

• Mise en œuvre de la purification et description des fonctionnalités
• Corrections des exercices d'application
• Test d'évaluation

• Comprendre les phénomènes chromatographiques mis en jeu pendant l'analyse pour optimiser le protocole de purification
• Transposer le changement d'échelle (de l'analytique vers la préparative)
• Mettre en œuvre une purification par HPLC préparative en phase inverse

Test d'évaluation en fin de formation.

Evaluation de la formation par les stagiaires. Envoi d'une attestation de formation.