HPLC préparative appliquée à la purification de peptides Présentiel
Dernière mise à jour : 19/11/2025
Description
1er jour
Formation théorique (3h30) COURS
- Principes généraux : comprendre les phénomènes mis en jeux en chromatographie
- Silices greffées : fabrication, état du marché, apprendre à choisir le bon support
- Grandeurs fondamentales : définitions, apprendre à les calculer
- Facteurs influençant les purifications : temp ; nature des éluants (compo et pH), géométrie colonne, volume d'injection, charge, type de greffage
Méthodologie (3h30) COURS
- Préparation de l'échantillon
- Détermination des paramètres chromatographiques
- Exemple d'étude méthodologique : pH-temps d'élution-estimation de la quantité à purifier-écriture de méthode
- Les bonnes pratiques et erreurs à éviter
- Exercices d'application à effectuer en autonomie
2ème jour
Travaux pratiques/Travaux dirigés (3h30)
- Détermination expérimentale du volume mort et du volume délai (3 injections)
- (1 injection sans colonne de 200µl de DMSO à 100% de voie A - 1 injection avec colonne de 200µl de DMSO à 100% de voie A - 1 élution de 10 minutes voie A (ACN) et voie B (ACN+5% Acétone))
- Déterminer par le calcul tous les paramètres chromatographiques (Débit optimal - volume retard - temps retard - quantité de silice - volume d'injection - temps réel d'élution - % réel d'élution)
- Détermination graphique du % d'élution observé estimé du composé ciblé
- Déterminer le gradient de purification
- Ecriture de la méthode sur l'appareil
- Estimer le temps de rétention en mode préparatif.
Travaux pratiques / Travaux dirigés (3h30)
- Mise en œuvre de la purification et description des fonctionnalités
- Corrections des exercices d'application
- Test d'évaluation
Objectifs de la formation
- Comprendre les phénomènes chromatographiques mis en jeu pendant l'analyse pour optimiser le protocole de purification
- Transposer le changement d'échelle (de l'analytique vers la préparative)
- Mettre en œuvre une purification par HPLC préparative en phase inverse
Public visé
Ingénieurs, techniciens, utilisateurs de la technique de chromatographie en phase liquide
Prérequis
Niveau Bac + 2 minimum en chimie ou en biologie. Connaissances de base en HPLC
Modalités pédagogiques
Alternance de cours (7 h) et de TP/TD (7 h).
Moyens et supports pédagogiques
Un support papier et un fichier au format PDF seront mis à disposition du participant.
Modalités d'évaluation et de suivi
Un suivi individualisé par des évaluations formatives est assuré. Une attestation de fin de formation est délivrée à la fin du parcours.
Formateurs
BL
BRUNEL Luc
Responsable scientifique
VP
VERDIE Pascal
Responsable scientifique
Modalités tarifaires spécifiques
Nos formations sont exonérées de TVA. Elles bénéficient de remises volumes : - 5% pour 3-4 inscrits, - 10% pour 5-6 inscrits, et - 20% à partir de 7 personnes. Une réduction de 20% est appliquée pour les agents salariés du CNRS.
Informations sur l'accessibilité
Notre laboratoire est entièrement accessible aux personnes à mobilité réduite (PMR). Un accès adapté, des espaces de circulation et des sanitaires spécifiques sont à votre disposition pour garantir votre confort et votre autonomie. Pour toute information complémentaire, veuillez nous contacter.