Purification de protéines : principes et méthodes Présentiel

Cette formation de 3,5 jours débute par un cours théorique sur les protéines, leurs structures, leurs caractéristiques, les différentes méthodes pour les surexprimer et les purifier. Des ateliers pratiques permettront aux stagiaires de purifier une protéine par différentes stratégies à l'aide d'automates. Pendant la formation, du temps sera consacré à des discussions avec les stagiaires autour des problématiques qu'ils rencontrent ou ont rencontrées dans la production/purification de protéines et des solutions possibles à envisager.

Cours (7 h)

• Introduction à la purification de protéine
• Structure des protéines : de l'acide-aminé à la structure quaternaire
• Caractérisation bio-informatique de sa protéine d'intérêt : exemple d'analyse
• Production de sa protéine d'intérêt : les différents systèmes hétérologues ; vecteurs, étiquettes ; conditions d'expression ; tampons et techniques de lyse
• Les différentes méthodes de purification : selon la solubilité, l'hydrophobicité, la charge, la taille
• Mise en situation avec un cas concret
• Présentation des automates de purification

Travaux pratiques (18 h)

• Lyse des bactéries
• Purification sur automate d'une protéine recombinante à partir d'un culot bactérien par 2 stratégies différentes
• Suivi de la purification par gel de polyacrylamide en conditions dénaturantes (SDS-PAGE) et Western-blot
• Dosage de la protéine purifiée par la méthode de Bradford et par spectrométrie UV
• Analyse des résultats et bilan

• Distinguer les différentes techniques de chromatographie pour la purification des protéines.
• Sélectionner et mettre en œuvre la (les) méthode(s) appropriée(s) pour la purification de protéines d'intérêt.
• Utiliser des automates pour la purification des protéines.
• Estimer la qualité et doser les protéines purifiées.