De la biologie moléculaire au génie génétique : théorie et pratique Présentiel

Cours (17,5 h)
De la cellule au gène : transfert de l'information génétique (qu'est-ce qu'un gène? La transcription, distinction entre le brin codant et le brin non codant de l'ADN ; la machinerie de la traduction)

Le génie génétique :

• Qu'est-ce qu'un "clonage"? Les différents types de clonages : clonages d'organismes entiers et clonages moléculaires (exemple chez les bactéries)
• Clonage moléculaire détaillé chez les bactéries :
  • comment réussir sa PCR ; les méthodes de clonage les plus utilisées : méthode "enzymes de restriction" et méthode "In-Fusion"
  • les vecteurs de clonages eucaryotes et/ou procaryotes : choix du vecteur (plasmide, virus, phage) en fonction de la taille de l'ADN étranger et de la cellule hôte
  • choix de la méthode d'introduction de l'ADN étranger dans la cellule hôte : transformation, transduction, conjugaison, transfection, choix des cellules hôtes
  • méthodes de détection et d'analyse des clones recombinants

Travaux pratiques et dirigés (17,5 h)

• Plusieurs exercices sous forme de travaux dirigés, en individuel ou en binôme, sur l'analyse de l'expression d'un gène, la PCR et le clonage
• Clonage d'un gène eucaryote dans un vecteur hybride eucaryote / procaryote et transformation dans une cellule procaryote :
  • amplification par PCR d'un gène eucaryote, électrophorèse et visualisation sur gel d'agarose
  • purification de l'ADN sur colonnes
  • préparation du vecteur : extraction et purification à partir d'une culture bactérienne, digestion enzymatique, ligature avec l'ADN étranger et introduction par électroporation dans les cellules hôtes
  • séléction sur milieu sélectif et identification par PCR sur colonies de clones recombinants
  • confirmation par analyse moléculaire des clones recombinants (extraction des plasmides recombinants et amplification par PCR de l'ADN étranger, électrophorèse)

• Acquérir les socles de la biologie moléculaire : distinction entre transcription et traduction d'un ARNm
• Acquérir les fondements du génie génétique : différentes techniques de clonage, distinction entre sélection et identification de clones recombinants
• Mettre en pratique les techniques de biologie moléculaire : extraction d'ADN, purification, amplification PCR, digestion rapide par les enzymes de restriction Fastdigest, analyse par électrophorèse, clonage (ligation rapide par l'enzyme FastLigate), électroporation, sélection et identification des clones recombinants