Production et analyse de protéines recombinantes Présentiel

AXE 12 - Biologie moléculaire et biochimie

Environnement scientifique et technique de la formation

Laboratoire de microbiologie et de génétique moléculaires
https://cbi-toulouse.fr

RESPONSABLE
Kamila BELHABICH-BAUMAS
Ingénieure d'études
UMR 5100

Production et analyse de protéines recombinantes

PROGRAMME
Cours (17,5 h)
- De la cellule au gène : rappels sur l'expression d'un gène (transcription, traduction) ; notions de mutations
- Les éléments nécessaires à la surexpression d'un gène : choix du vecteur et choix de la cellule hôte
- Méthodes de fusion de gènes et d'étiquetage de protéines : étiquetage d'un gène dans un vecteur par la méthode des enzymes de restriction, par la méthode "In-Fusion", par recombinaison homologue
- Méthodes de mise en évidence de l'expression génique ou de la production de protéines recombinantes, détections par Western Blot (principe de l'immuno-détection par chimioluminescence, par la phosphatase alcaline (PhoA) et par fluorescence)

Travaux pratiques et dirigés (17,5 h)

À L'ISSUE DE LA FORMATION
Evaluation de la formation par les stagiaires
Envoi d'une attestation de formation

DATE DU STAGE
Réf. 25 229 : du lundi 02/06/25 à 09:30 au vendredi 06/06/25 à 17:00

- Travaux dirigés sur l'expression génique et sur le clonage en respectant le cadre ouvert de lecture : utilisation du logiciel "Clone Manager V 9"
- Mise en culture des cellules bactériennes en conditions stériles et induction de l'expression d'un gène par l'IPTG
- Extraction des protéines totales, dosages, dépôts sur 2 gels et migration, visualisation des protéines sur 1 gel, transfert des protéines du 2ème gel sur membrane nitrocellulose, visualisation des protéines sur membrane
- Identification

• Acquérir les fondamentaux de la biologie moléculaire et de la biochimie des protéines pour produire, extraire et analyser les protéines recombinantes
• Maîtriser l'utilisation du logiciel Clone Manager pour réussir le clonage et la production de protéines in silico
• Choisir la méthode appropriée pour détecter les protéines recombinantes