Innovation et analyse de culture 3D à partir de cellules souches humaines Présentiel

AXE 11 - Biologie cellulaire et microbiologie

Environnement scientifique et technique de la formation

Institut NeuroMyogène Physiopathologie et Génétique du Neurone et du Muscle
https://pgnm.inmg.fr/

RESPONSABLE
Arnaud JACQUIER
Chercheur
UMR 5261

LIEU
LYON (69)

ORGANISATION
26 h
8 stagiaires maximum
Lieux accessibles aux PMR

PROGRAMME
Cours interactifs
- Bases théoriques sur les cellules souches humaines à pluripotence induite (iPS)
- Les différentes techniques et modèles de cultures 3D : conceptions, avantages, inconvénients et problématiques rencontrées
- La culture 3D avec l'utilisation de biomatériaux tels que les hydrogels : exemple du muscle cardiaque
- Techniques d'imagerie et observation de cultures cellulaires 3D
- Table ronde : aide personnalisée à la conception de cultures complexes ainsi que leurs analyses possibles

Manipulations au laboratoire
Chaque stagiaire manipulera des iPS en laboratoire confiné (L2) et débutera une culture 3D. Ces cultures seront complexifiées afin d'améliorer leur maturité et leur pertinence. Pour finir, les stagiaires réaliseront des étapes clés de protocoles menant à l'analyse des cultures 3D par microscopie.
- Vous partirez d'iPS afin de former des sphéroïdes de 3 manières différentes pour obtenir des progéniteurs de neurones
- Vous apprendrez à inclure les sphéroïdes en diverses matrices et à les cultiver dans plusieurs dispositifs permettant de guider la pousse axonale (chambre en silicone et puce microfluidique). Par la suite, vous les analyserez par microscopie à fluorescence
- Vous générerez des cultures 3D de cardiomyocytes associées à des hydrogels
- Vous préparerez des sphéroïdes pour des analyses par microscopie en réalisant des étapes clés pour la transparisation et la coupe au vibratome. Cette session sera suivie d'une analyse par microscopie confocale et par microscopie à feuillet de lumière

EQUIPEMENT
Laboratoire en confinement L2, EPI, microscopes et caméras, 4 PSM, centrifugeuses, incubateurs, petits équipements de laboratoire, Makrolite 4K, vibratome. Microscopie à feuillet de lumière, confocale et apotome à l'INMG ou sur le plateau technique de microscopie du CIQLE

INTERVENANTS
A. Jacquier, L. Coudert, V. Gache, G Boncompain (chercheurs, PGNM), A. Hennick, J. Carras (ingénieurs, PGNM) et B. Chapuis (ingénieur, CIQLE)

• Connaître les différentes techniques pour passer d'une culture de cellules souches 2D à 3D : formation de sphéroïdes et d'organoïdes de modèles neuronaux et cardiomyocytes
• Prendre en main différents systèmes de cultures 3D à partir de cellules souches adultes ou d'iPS : utilisation de puces en silicone, de puces microfluidiques et de matrices type hydrogel
• Appréhender et pratiquer différentes techniques d'analyses des cultures 3D