L’ELISPOT pour la quantification de la fréquence des cellules T spécifiques de l'antigène chez l’homme Présentiel

L'ELISPOT (Enzyme-Linked Immunospot Assay) permet de mesurer la fréquence des lymphocytes T sécrétant des cytokines en réponse à une stimulation antigénique ou des lymphocytes B sécrétant des immunoglobulines à l'aide d'une technique immuno-enzymatique. L'ELISPOT est utilisé couramment en immuno-monitoring chez l'homme. L'objectif de la formation est d'acquérir les connaissances théoriques et pratiques pour mesurer en ELISPOT la fréquence de cellules T circulantes spécifiques d'un antigène donné chez l'homme.

La formation abordera :

• La conception : antigènes, ELISPOT simples ou doubles, réactifs
• La réalisation : manipulation des PBMC, comptage et mesure de la viabilité des PBMC, incubation avec les antigènes en plaque ELISPOT, révélation et lecture des plaques ELISPOT
• Le calcul de la fréquence des cellules T spécifique d'un antigène dans l'échantillon et sur une cohorte de sujets

Il est prévu la réalisation d'un ELISPOT en laboratoire L2 sous poste de sécurité microbiologique sur des échantillons de PBMC cryopréservés ainsi qu'une analyse de cohortes sur des métadonnées biologiques pour la réalisation de l'ELISPOT. Tous les équipements de protection individuelle, de laboratoire, et réactifs nécessaires seront mis à la disposition du participant appartenant au laboratoire de formation. L'objectif d'apprentissage de la partie pratique sera la fréquence de cellules T spécifiques d'antigènes de virus ou de parasites. Alternativement et sur entente préalable, les participants peuvent soumettre leurs propres échantillons PBMC, antigènes ou données.

1er jour
Matin, théorie :

• Introduction aux ELISPOT pour mesurer la fréquence des cellules T spécifiques de l'antigène chez l'homme

Après-midi, pratique :

• Décongélation de PBMC de sujets sains, comptage cellulaire avec plusieurs méthodes automatisées, préparation des plaques ELISPOT.

Chaque participant disposera d'un matériel de manipulation non partagé. Nous introduirons dans l'expérience des PBMC répondant ou pas aux critères de qualité requis pour des tests cellulaires ainsi qu'une standardisation nécessaire pour une comparaison de plusieurs analyses.

2ème jour
Matin, pratique :

• Mise en plaque des ELISPOT. Lecture automatisée de Spot Forming Cells sur ELISPOT révélés

Après-midi, pratique :

• Exemple d'immuno-monitoring par ELISPOT sur une cohorte de sujets et calcul de la LOD et de la réponse spécifique de l'antigène.

Chaque participant travaillera sur un fichier Excel d'analyses.

3ème jour
Matin, pratique :

• Révélation des plaques ELISPOT et conclusions. 3 participants au maximum réunis dans 1 seul groupe.

• Conceptualiser les ELISPOT pour la mesure de la fréquence des cellules T spécifiques de l'antigène chez l'homme
• Maîtriser la cryopréservation des PBMC humains
• Mettre au point un protocole en ELISPOT avec ou sans standardisation
• Analyser des échantillons de PBMC humains en ELISPOT, en situation réelle en laboratoire L2 sous PSM
• Mettre en forme les résultats obtenus sur l'échantillon individuel et sur une cohorte de sujets